 Attention : Le filtre ne doit pas adsorber L* (ce qui nécessite parfois de tester plusieurs types de filtre). Lorsque l'on filtre, l’équilibre n’est pas perturbé car RL* est plaqué contre le filtre par le vide. De plus, la vitesse de filtration est bien plus rapide que la vitesse de dissociation. La plupart du temps, tout de suite après avoir filtré le milieu d'incubation, plusieurs rinçages sont effectués, avec un volume de tampon de 2-3 ml. Détermination du nombre de rinçages à effectuer : Afin de déterminer le nombre optimal de rinçages à effectuer lors d'une expérience de liaison, on étudie la liaison spécifique en fonction du nombre de rinçages effectués rapidement et avec un même volume de tampon (2-3 ml) (voir figure ci-dessous).  Détermination de la liaison spécifique : La terminologie des conditions étudiées dans une expérience de liaison est la suivante : - Condition A : elle consiste à déterminer de la liaison totale (R + L* ). - Condition B : elle consiste à déterminer de la liaison non spécifique (R + L* + L froid en excès ). - Condition C : elle consiste à filtrer le ligand radioactif L* seul. - Condition D : elle consiste à filtrer le ligand radioactif L* plus du ligand froid en excès. Si l’adsorption du L* au filtre est nulle ou peu importante, la liaison spécifique sera égale à : Si l’adsorption du L* au filtre reste importante après avoir essayé tous les types de filtres, la liaison spécifique devra être calculée de la manière suivante : Les enzymes protéolytiques et leurs inhibiteurs : Lorsque l'on effectue un homogénat ou une préparation de membranes, à partir de cellules en culture, de tissu, ou d'un organe, de nombreuses activités enzymatiques sont libérées dans le milieu. Les enzymes à activité protéolytiques sont génantes car elles vont entraîner une dégradation du récepteur et du ligand, si ce dernier est un peptide ou une protéine. Les expériences de liaison sur homogénats ou sur membranes plasmiques seront donc réalisés en présence d'inhibiteurs de protéases. Le tableau ci-dessous cite quelques inhibiteurs pour chacune des quatre classes d'enzymes protéolytiques.
2 - Expériences de liaison sur des cellules en culture. Conditions expérimentales : Le plus souvent, ce type d'expérience est réalisé en boîte de culture de 24 puits. Conditions indispensables :
Composition du tampon physiologique utilisé :
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